冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)電(dian)鏡(jing)技(ji)術解(jie)析(xi)結(jie)構(gou)主要風險在：A.樣(yang)(yang)品(pin)(pin)很(hen)不(bu)穩(wen)定，樣(yang)(yang)品(pin)(pin)寄送過(guo)來(lai)的(de)(de)(de)(de)時候，已經降解(jie)或(huo)者聚集，無(wu)法(fa)進行后續處理；B.樣(yang)(yang)品(pin)(pin)在冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)制(zhi)樣(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)過(guo)程中，可能會(hui)被凍(dong)(dong)碎，從(cong)而(er)(er)無(wu)法(fa)進行后續處理；C.樣(yang)(yang)品(pin)(pin)純度(du)(du)可能很(hen)好，但是均一(yi)度(du)(du)很(hen)差，從(cong)而(er)(er)難以獲(huo)得樣(yang)(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)高分(fen)(fen)辨結(jie)構(gou)；D.我(wo)們關(guan)心的(de)(de)(de)(de)區域可能在整個復(fu)合(he)(he)體(ti)中有(you)很(hen)強的(de)(de)(de)(de)柔性，從(cong)而(er)(er)經過(guo)二維(wei)(wei)或(huo)者三(san)維(wei)(wei)平均后，我(wo)們關(guan)心區域的(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)辨率會(hui)比較差甚至看不(bu)見，達不(bu)到我(wo)們的(de)(de)(de)(de)預期；E.一(yi)些(xie)配體(ti)，比如藥物(wu)前(qian)體(ti)分(fen)(fen)子，分(fen)(fen)子量(liang)太(tai)小(xiao)，不(bu)一(yi)定能在電(dian)鏡(jing)的(de)(de)(de)(de)密度(du)(du)圖(tu)中觀測到；F.對于合(he)(he)適(shi)的(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)，我(wo)們冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)制(zhi)樣(yang)(yang)需(xu)要優(you)(you)化(hua)的(de)(de)(de)(de)參數有(you)很(hen)多，包括樣(yang)(yang)品(pin)(pin)濃度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)優(you)(you)化(hua)，blottime的(de)(de)(de)(de)優(you)(you)化(hua)，溫度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)優(you)(you)化(hua)，grid規格（銅網(wang)或(huo)者金(jin)網(wang)）的(de)(de)(de)(de)優(you)(you)化(hua)等(deng)一(yi)系列條件(jian)的(de)(de)(de)(de)優(you)(you)化(hua)。因此冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)電(dian)鏡(jing)制(zhi)樣(yang)(yang)需(xu)要豐富(fu)的(de)(de)(de)(de)經驗(yan)和充足(zu)的(de)(de)(de)(de)機時支持，不(bu)同的(de)(de)(de)(de)實驗(yan)者，成功(gong)率可能差別(bie)很(hen)大(da)。冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)電(dian)鏡(jing)技(ji)術的(de)(de)(de)(de)獨(du)特優(you)(you)勢：適(shi)合(he)(he)于研(yan)究結(jie)構(gou)不(bu)規則的(de)(de)(de)(de)大(da)分(fen)(fen)子復(fu)合(he)(he)物(wu)，對于分(fen)(fen)子量(liang)的(de)(de)(de)(de)上(shang)限沒有(you)限制(zhi)。湖州原位冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)電(dian)鏡(jing)技(ji)術服(fu)務(wu)公司

冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)(jing)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)測定結(jie)(jie)構(gou)(gou)的(de)(de)(de)(de)幾種方(fang)法(fa)(fa)：X射線晶(jing)(jing)體(ti)(ti)學(xue)、NMR、和(he)(he)(he)冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)(jing)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)各有優(you)缺點，將(jiang)這(zhe)(zhe)幾種方(fang)法(fa)(fa)結(jie)(jie)合共(gong)同(tong)研(yan)究結(jie)(jie)構(gou)(gou)與(yu)功(gong)能(neng)將(jiang)使(shi)結(jie)(jie)構(gou)(gou)生(sheng)物(wu)學(xue)家對(dui)所(suo)研(yan)究的(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)有更為(wei)全部的(de)(de)(de)(de)理(li)解，而這(zhe)(zhe)些信息是單(dan)用(yong)(yong)任何一個方(fang)法(fa)(fa)所(suo)無法(fa)(fa)獲得(de)(de)的(de)(de)(de)(de)。將(jiang)X射線晶(jing)(jing)體(ti)(ti)模(mo)(mo)型(xing)與(yu)經(jing)電(dian)鏡(jing)(jing)獲得(de)(de)的(de)(de)(de)(de)密度(du)圖重(zhong)(zhong)合可(ke)以(yi)對(dui)電(dian)鏡(jing)(jing)三維重(zhong)(zhong)構(gou)(gou)的(de)(de)(de)(de)結(jie)(jie)構(gou)(gou)作更詳盡的(de)(de)(de)(de)解釋，例如將(jiang)牛的(de)(de)(de)(de)水通(tong)道(dao)（AQP1,與(yu)人(ren)的(de)(de)(de)(de)有90%同(tong)源性）的(de)(de)(de)(de)高分(fen)辨率(lv)的(de)(de)(de)(de)晶(jing)(jing)體(ti)(ti)結(jie)(jie)構(gou)(gou)與(yu)先前用(yong)(yong)冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)(jing)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)重(zhong)(zhong)構(gou)(gou)出(chu)來(lai)的(de)(de)(de)(de)人(ren)的(de)(de)(de)(de)中等(deng)分(fen)辨率(lv)水通(tong)道(dao)的(de)(de)(de)(de)三維結(jie)(jie)構(gou)(gou)進行比較，可(ke)以(yi)進一步確(que)定冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)(jing)獲得(de)(de)的(de)(de)(de)(de)中等(deng)分(fen)辨率(lv)的(de)(de)(de)(de)結(jie)(jie)構(gou)(gou)，同(tong)時(shi)也顯示出(chu)了冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)(jing)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)的(de)(de)(de)(de)優(you)勢和(he)(he)(he)局限性。另一方(fang)面，較低分(fen)辨率(lv)的(de)(de)(de)(de)電(dian)鏡(jing)(jing)三維重(zhong)(zhong)構(gou)(gou)模(mo)(mo)型(xing)可(ke)以(yi)用(yong)(yong)來(lai)解釋病毒或大分(fen)子(zi)的(de)(de)(de)(de)晶(jing)(jing)體(ti)(ti)結(jie)(jie)構(gou)(gou)。而且，將(jiang)X射線晶(jing)(jing)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)精細結(jie)(jie)構(gou)(gou)與(yu)冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)(jing)的(de)(de)(de)(de)重(zhong)(zhong)構(gou)(gou)模(mo)(mo)型(xing)結(jie)(jie)合構(gou)(gou)建生(sheng)物(wu)大分(fen)子(zi)復(fu)合物(wu)在發(fa)揮功(gong)生(sheng)物(wu)學(xue)功(gong)能(neng)過程(cheng)(cheng)中出(chu)現(xian)的(de)(de)(de)(de)構(gou)(gou)像變(bian)化模(mo)(mo)型(xing)。這(zhe)(zhe)很(hen)大程(cheng)(cheng)度(du)增(zeng)加了我們對(dui)于復(fu)雜分(fen)子(zi)的(de)(de)(de)(de)活動機制的(de)(de)(de)(de)理(li)解。電(dian)子(zi)顯微技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)，成(cheng)像技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)，計算機技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)，生(sheng)物(wu)信息技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)等(deng)不同(tong)學(xue)科的(de)(de)(de)(de)結(jie)(jie)合，將(jiang)為(wei)我們提供(gong)研(yan)究生(sheng)命現(xian)象與(yu)本質的(de)(de)(de)(de)強有力(li)的(de)(de)(de)(de)手段。金(jin)華冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)(jing)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)方(fang)案冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)(jing)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)測定結(jie)(jie)構(gou)(gou)的(de)(de)(de)(de)幾種方(fang)法(fa)(fa)：X射線晶(jing)(jing)體(ti)(ti)學(xue)、NMR、和(he)(he)(he)冷(leng)(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)(jing)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)。

冷凍電(dian)子(zi)顯微鏡技(ji)術(shu)之樣(yang)品成(cheng)(cheng)像(xiang)：低(di)劑(ji)量(liang)(liang)輻(fu)(fu)照(zhao)(zhao)成(cheng)(cheng)像(xiang)，普通的(de)(de)樣(yang)品材料在進(jin)行TEM表征時(shi)，電(dian)子(zi)劑(ji)量(liang)(liang)越(yue)高，成(cheng)(cheng)像(xiang)質量(liang)(liang)越(yue)好。但(dan)生物樣(yang)品受到的(de)(de)輻(fu)(fu)照(zhao)(zhao)損(sun)傷卻是和累積的(de)(de)輻(fu)(fu)照(zhao)(zhao)總劑(ji)量(liang)(liang)相(xiang)關(guan)的(de)(de)。更詳細(xi)一(yi)點說，隨著輻(fu)(fu)照(zhao)(zhao)劑(ji)量(liang)(liang)的(de)(de)增加(jia)，輻(fu)(fu)照(zhao)(zhao)損(sun)傷對高分(fen)辨細(xi)節(jie)的(de)(de)破壞更嚴重(zhong)。因此(ci)，為了盡可(ke)能地獲得(de)(de)更多的(de)(de)細(xi)節(jie)，就必須要對樣(yang)品采用(yong)用(yong)低(di)劑(ji)量(liang)(liang)輻(fu)(fu)照(zhao)(zhao)成(cheng)(cheng)像(xiang)。在冷凍電(dian)鏡技(ji)術(shu)中，常用(yong)的(de)(de)低(di)劑(ji)量(liang)(liang)輻(fu)(fu)照(zhao)(zhao)成(cheng)(cheng)像(xiang)法(fa)有兩種：冷凍電(dian)子(zi)斷(duan)層(ceng)掃(sao)描法(fa)，單顆粒分(fen)析成(cheng)(cheng)像(xiang)法(fa)。冷凍電(dian)鏡技(ji)術(shu)中的(de)(de)電(dian)子(zi)斷(duan)層(ceng)掃(sao)描技(ji)術(shu)（cryogeniccomputedtomography）：進(jin)行斷(duan)層(ceng)掃(sao)描時(shi)，樣(yang)品被連(lian)續不(bu)停地旋轉，并在每個旋轉角度上都進(jin)行一(yi)次成(cheng)(cheng)像(xiang)。每一(yi)幅電(dian)子(zi)顯微像(xiang)是物體(ti)在不(bu)同(tong)投(tou)影方(fang)向(xiang)(xiang)的(de)(de)二(er)維(wei)投(tou)影像(xiang),經傅立(li)葉(xie)變(bian)換會得(de)(de)到一(yi)系列不(bu)同(tong)取向(xiang)(xiang)的(de)(de)截(jie)面(mian)，當截(jie)面(mian)足夠(gou)多時(shi)，會得(de)(de)到傅立(li)葉(xie)空間的(de)(de)三維(wei)信息(xi)，再經傅立(li)葉(xie)反變(bian)換便(bian)能得(de)(de)到物體(ti)的(de)(de)三維(wei)結構。

冷(leng)(leng)凍(dong)電(dian)子顯微鏡(jing)技(ji)術具有研(yan)究(jiu)對象普遍(bian)、樣品需求量(liang)少、更(geng)接(jie)近(jin)生理狀態等(deng)獨(du)特優勢，隨(sui)著(zhu)電(dian)子顯微鏡(jing)的硬件設備和(he)結構解析的軟(ruan)件算(suan)法(fa)等(deng)方面(mian)不斷取得的重要突破，冷(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)技(ji)術必將在研(yan)究(jiu)對象、分(fen)(fen)辨(bian)率水平和(he)研(yan)究(jiu)方法(fa)等(deng)各個(ge)方面(mian)取得重大進展。當然，冷(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)技(ji)術也(ye)面(mian)臨著(zhu)許多(duo)技(ji)術上(shang)的挑(tiao)戰，怎樣改(gai)進樣品的制備技(ji)術，如何如何客(ke)觀(guan)地對三維重構的結果(guo)進行(xing)檢驗(yan)、明確(que)結構解析的分(fen)(fen)辨(bian)率以(yi)及(ji)對生物(wu)(wu)大分(fen)(fen)子構象不均(jun)一性的分(fen)(fen)析等(deng)仍然是(shi)冷(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)研(yan)究(jiu)中有待解決的重要問題。但(dan)是(shi)，挑(tiao)戰越(yue)多(duo)，機(ji)遇也(ye)就越(yue)多(duo)。相信有關的研(yan)究(jiu)者們，一定能夠冷(leng)(leng)靜抓住機(ji)遇，勇(yong)敢迎接(jie)挑(tiao)戰，讓冷(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)技(ji)術在結構生物(wu)(wu)學(xue)、細胞生物(wu)(wu)學(xue)等(deng)領(ling)域發(fa)揮更(geng)大的作用，幫助我們更(geng)加(jia)深入、透徹地研(yan)究(jiu)各種生命現(xian)象。冷(leng)(leng)凍(dong)電(dian)鏡(jing)技(ji)術主要應用在單個(ge)蛋白質(zhi)分(fen)(fen)子結構的分(fen)(fen)析方面(mian)。

冷(leng)凍電(dian)鏡(jing)技(ji)術(shu)解(jie)(jie)析(xi)結(jie)構(gou)的一(yi)般(ban)流(liu)程(cheng)是(shi)(shi)怎樣(yang)(yang)(yang)的？對樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)的要求是(shi)(shi)什么？冷(leng)凍電(dian)鏡(jing)解(jie)(jie)析(xi)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)結(jie)構(gou)一(yi)般(ban)流(liu)程(cheng)為：蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)表達(da)純化；負(fu)染樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)準備：約(yue)(yue)2小時(shi)完成；負(fu)染樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)的數據收(shou)集：約(yue)(yue)8小時(shi)完成；冷(leng)凍樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)的準備：約(yue)(yue)4小時(shi)完成；冷(leng)凍樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)的數據收(shou)集：48-120小時(shi)完成。三維結(jie)構(gou)重建。冷(leng)凍電(dian)鏡(jing)解(jie)(jie)析(xi)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)結(jie)構(gou)對蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)的要求：分(fen)子量(liang)：一(yi)般(ban)需要樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)的分(fen)子量(liang)在200kD以上。緩(huan)沖液：緩(huan)沖液中不能(neng)含有(you)(you)多糖，DMSO，甘油等有(you)(you)機物質(zhi)(zhi)，這些會降低(di)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)的襯度，難以獲得(de)高分(fen)辨的三維結(jie)構(gou)。一(yi)般(ban)而言，緩(huan)沖液為20mMHepes，150mMNaCl。濃(nong)度：一(yi)般(ban)而言，可溶性(xing)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)濃(nong)度應在1mg/ml左(zuo)右，膜蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)應保證濃(nong)度在5mg/ml左(zuo)右。體積(ji)：20ul足夠（前提是(shi)(shi)需要蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)濃(nong)度達(da)標，做一(yi)個樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)3ul左(zuo)右）。均(jun)一(yi)性(xing)：分(fen)子篩(shai)行為表現為單一(yi)的峰，均(jun)一(yi)性(xing)大于90%。冷(leng)凍電(dian)鏡(jing)技(ji)術(shu)之冷(leng)凍透射電(dian)鏡(jing)優(you)點：加速電(dian)壓高，電(dian)子能(neng)穿透厚樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)。廣州低(di)溫電(dian)子顯微鏡(jing)技(ji)術(shu)方(fang)案

冷凍電鏡(jing)技術(shu)使生(sheng)物(wu)分子成像(xiang)，變得更加簡單，把生(sheng)物(wu)化學帶入了(le)一個新紀元。湖州(zhou)原位冷凍電鏡(jing)技術(shu)服(fu)務公司(si)

低(di)溫冷(leng)凍(dong)(dong)透射(she)電(dian)(dian)鏡(jing)(jing)技術(shu)的(de)(de)特(te)點：相對于常(chang)溫透射(she)電(dian)(dian)鏡(jing)(jing)，低(di)溫透射(she)電(dian)(dian)鏡(jing)(jing)的(de)(de)優勢有(you)(you)：①快速冷(leng)凍(dong)(dong)制樣(yang)(yang)技術(shu)將樣(yang)(yang)品(pin)固定在玻璃態(tai)的(de)(de)冰層中，避(bi)免(mian)了(le)水或溶劑結(jie)晶對樣(yang)(yang)品(pin)結(jie)構(gou)(gou)的(de)(de)破壞(huai)，能夠保持液(ye)相中有(you)(you)機分(fen)子(zi)(zi)自組裝體(ti)和化(hua)學(xue)反應(ying)中間(jian)體(ti)的(de)(de)微觀結(jie)構(gou)(gou)，避(bi)免(mian)了(le)樣(yang)(yang)品(pin)干燥(zao)引(yin)起的(de)(de)結(jie)構(gou)(gou)變(bian)化(hua);②高(gao)分(fen)子(zi)(zi)及化(hua)學(xue)反應(ying)體(ti)系常(chang)常(chang)具有(you)(you)非(fei)平衡態(tai)結(jie)構(gou)(gou)，快速冷(leng)凍(dong)(dong)制樣(yang)(yang)技術(shu)能夠保持住非(fei)平衡態(tai)結(jie)構(gou)(gou)，進而(er)得(de)以觀察;③低(di)溫條件能夠盡可能保持有(you)(you)機和高(gao)分(fen)子(zi)(zi)等軟物質(zhi)材料(liao)的(de)(de)微觀結(jie)構(gou)(gou)，明顯(xian)減少電(dian)(dian)子(zi)(zi)束對樣(yang)(yang)品(pin)的(de)(de)損(sun)傷。湖(hu)州原(yuan)位冷(leng)凍(dong)(dong)電(dian)(dian)鏡(jing)(jing)技術(shu)服(fu)務公司

上(shang)海司(si)鼎(ding)生物(wu)(wu)科技(ji)(ji)有(you)(you)限公司(si)主(zhu)要經(jing)營范圍是醫(yi)藥健(jian)康，擁(yong)有(you)(you)一支專業技(ji)(ji)術(shu)(shu)團隊(dui)和良(liang)好的(de)市場口碑。司(si)鼎(ding)生物(wu)(wu)致力(li)(li)(li)于(yu)為(wei)客戶(hu)提供(gong)良(liang)好的(de)免(mian)疫印(yin)跡（WB)技(ji)(ji)術(shu)(shu)服務(wu)，熒光(guang)定量(liang)PCR技(ji)(ji)術(shu)(shu)服務(wu)，膜片鉗(qian)電生理(li)技(ji)(ji)術(shu)(shu)服務(wu)，在體光(guang)纖成(cheng)像記錄技(ji)(ji)術(shu)(shu)服務(wu)，一切以用戶(hu)需(xu)求為(wei)中心，深受廣大(da)客戶(hu)的(de)歡迎。公司(si)從事醫(yi)藥健(jian)康多年，有(you)(you)著創新的(de)設計、強大(da)的(de)技(ji)(ji)術(shu)(shu)，還(huan)有(you)(you)一批(pi)專業化的(de)隊(dui)伍(wu)，確(que)保(bao)為(wei)客戶(hu)提供(gong)良(liang)好的(de)產品及服務(wu)。司(si)鼎(ding)生物(wu)(wu)秉(bing)承“客戶(hu)為(wei)尊、服務(wu)為(wei)榮、創意為(wei)先、技(ji)(ji)術(shu)(shu)為(wei)實(shi)”的(de)經(jing)營理(li)念，全力(li)(li)(li)打造公司(si)的(de)重點競爭力(li)(li)(li)。

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